72分光光度计使用方法
分光光度计使用的基本原理:利用吸光光度法的原理,采用棱镜或光栅等分光器获得纯度较高的单色光来测量未知溶液的浓度的方法。
分光光度法测量的理论依据是朗伯-比耳定律:当溶液中得物质在光的照射和激发下,产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的,各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时,溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c(g/L)或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc(a是比例系数)。当c的单位为mol/L时,比例系数用ε表示,则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L.mol-1.cm-1它是有色物质在一定波长下得特征常数。T(透射率)=I/I0A(吸光度)=-lgT或A=K.C.L(比色皿的厚度)测定时,入射光I,吸光系数和溶液的光径长度不变时,透射光是根据溶液的浓度而变化的,即“K”为常数。比色皿厚度一定,“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。
常用分光光度计:可见光、紫外、红外分光光度计,荧光光度计,火焰分光光度计等。72分光光度计是一种可见光分光光度计,由我国生产,有不同型号,以下操作方法适用于722型分光光度计。
插上插头,接通电源,打开暗箱盖,预热20min。注意:分光光度计在
接通电源而不用时,必须打开暗箱盖,以免光电管老化。
将准备好的试剂倒入比色杯中,用吸水纸擦去比色杯外侧水珠,并依次
放入比色杯架中。注意:手拿比色杯毛面,试剂倒入杯中满2/3即可,不得将比色杯放在仪器上。
3、调节所需波长,灵敏度调至“1”(信号放大倍率最小),选择旋钮至“T”。
4、调“0”:打开暗箱盖,用调“0”旋钮调节。
5、调“100%”:盖上暗箱盖,用调“100%”旋钮调节,让光线通过“空白
管”。
6、重复调“0”和调“100%”数次。注意:若跳不到“0”和“100%”,可
将灵敏度调制“2”或更高,不得用力强行旋转旋钮,以免损坏。
7、将选择旋钮由“T”调至“A”,此时读数应由“100”至“0”,若不为“0”,
可用“消光零”旋钮调节。
8、拉动拉杆,分别读取“A标”和“A样”。
9、取出比色杯,弃去溶液,洗净晾干,备用。
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