南开大学医学院医学微生物学实验室安全教育教材（试行）
为保障医学微生物学实验室正常的教学工作和参与人员的安全特编写本教材；本教材为理论教学使用教材《医学微生物徐》（人民卫生出版社出版，第七版）第六章《生物安全》内容的补充，必须在第一次实验教学前完成该章内容的教学和本教材的培训；所有进入实验室的人员必须经过本教材的培训方可具有参加医学微生物实验教学和学习的资格。
一、生物安全管理
1、实验课负责教师负责制订和采用医学微生物学实验室安全教育教材和相关生物安全管理文件。
2、实验课授课教师负责提供实验室安全培训。培训中必须将医学微生物学实验室的特殊危害告知实验室人员，要求学生遵循标准的操作和规程。实验室内应备有可供取阅的安全操作手册。
二、实验室生物安全规程
（一）进入规定
1、学生应熟识国际通用的生物危害警告标志（见图一），在处理危险度2级或更高危险度级别的微生物的实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。
图一 生物危害警告标志
2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。
3、进行实验教学时实验室的门应保持关闭。
（二）操作规范
1、严禁用口吸移液管。
2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。
3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。
4、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向授课老师报告。
（三）人员防护
1、在实验教学开始之前，必须身着长袖实验服。
2、在进行可能直接或意外接触到具有潜在感染性的材料的操作时，应戴上合适的手套。手套用完摘除后必须洗手。
3、在处理完感染性实验材料后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。
4、有喷溅的可能时，为了防止眼睛或面部受到泼溅物的伤害，应戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。
5、不得披散头发，头发长度以发际不超过下颌为标准，否则必须带工作帽或进行适当处理，不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。
6、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。
7、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。
（四）实验区
1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。
2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。
3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。
4、在进行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。
5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。
（五）实验室生物安全预防技术
避免感染性物质的扩散
1、为了避免被接种物洒落，微生物接种环的直径应为2～3mm并完全封闭，柄的长度应小于6cm以减小抖动。
2、将被处理的废弃标本和培养物应当放置在防漏的容器内（如实验室废弃物袋）。
3、在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒方法清除工作区的污染。
避免感染性物质的注入
1、通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。
2、锐器损伤（如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物质。
3、减少使用注射器和针头（可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头）。
三、实验室设备
处理生物安全危害时，使用安全设施并结合规范的操作将有助于降低危险。选择设备时应符合一些基本原则，即：
1、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触
2、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求
3、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件
4、设备的设计、建造与安装应便于操作、易于维护、清洁、清除污染和进行质量检验。应尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品。
生物安全柜的使用
1、参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性。发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出﹑破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。
2、生物安全柜运行正常时才能使用。
3、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。
4、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。
5、安全柜内不能使用本生灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。
6、所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。
7、尽量减少操作者身后的人员活动。
8、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。
9、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。
10、工作完成后以及每天下班前，使用消毒液对生物安全柜的表面进行擦拭。
11、在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。
12、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。
离心机的使用
1、在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。
2、按照操作手册来操作离心机。
3、离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。
4、用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧（最好使用螺旋盖）。
5、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。
6、离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。
7、空离心桶用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70％）来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。
8、当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。
9、每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范。
10、每天检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。
11、每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。
12、使用后将离心桶倒置存放使平衡液流干。
移液管和移液辅助器的使用
1、应使用移液辅助器，严禁用口吸取。
2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。
3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。
4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。
5、不能将液体从移液管内用力吹出。
6、刻度对应（Mark-to-mark）移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。
7、污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。
8、盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。
9、有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。
10、在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射针头和注射器。
11、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。
四、废弃物处理
废弃物是指将要丢弃的所有物品。在实验室内，废弃物最终的处理方式与其污染被清除的情况紧密相关。废弃物处理的首要原则是所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。